Programa
Fundamentos de cultura celular e biossegurança
– Introdução: conceitos de cultura celular (objetivos da cultura celular in vitro, tipos de células, linhas celulares vs. culturas primárias, meios, suplementos e outros reagentes).
– Laboratório de cultura celular: equipamentos e fluxo de trabalho (câmaras de fluxo laminar, incubadoras de CO₂, microscópio de contraste de fase; limpeza e manutenção).
– Biossegurança e boas práticas: BSL2 típico; EPI; boas práticas de assepsia; classificação e gestão de resíduos.
– Técnicas básicas de cultura de células: subcultura, contagem (manual/automática), semear células, criopreservação e descongelamento.
– Modelos avançados: esferoides vs. organoides; requisitos de matriz; diferenças face a 2D.
– Contaminação: tipos, prevenção, deteção e resposta (bacteriana/fúngica, micoplasma, cruzada; rotinas de controlo de qualidade).
– Boas práticas & resolução de problemas.
Resultados de aprendizagem: adquirir conhecimentos base para a execução de procedimentos de cultura celular; identificar riscos e aplicar BPL/BSL; reconhecer sinais de contaminação e plano de resposta.
Ensaios funcionais e de biologia molecular
– Viabilidade, proliferação e sobrevivência: MTT/XTT/Resazurina/ATP); curvas dose-resposta e cálculo de IC50.
– Imunocitoquímica/ imunofluorescência: marcação de marcadores, controlos negativos/“isotype”, noções de quantificação.
– Citometria de fluxo: princípios e aplicações (marcação, protocolos básicos para avaliação da viabilidade/apoptose).
– Genotoxicidade e citotoxicidade: ensaio cometa, γ-H2AX, micronúcleos.
– Migração e invasão: wound-healing assay, Transwell®.
– Isolamento de ácidos nucleicos: DNA/RNA de cultura; qualidade/quantidade.
Resultados de aprendizagem: escolher e executar um ensaio de acordo com o racional científico; compreender limites e fontes de enviesamento; interpretar resultados.
Desenho experimental e bioestatística
– Desenho de estudos in vitro: controlos, réplicas (técnicas/biológicas), randomização, curvas e normalização; checklists de reprodutibilidade.
– Bioestatística essencial: tipos de dados, valor de n, intervalo de confiança, testes paramétricos vs. não paramétricos, representação de resultados.
Resultados de aprendizagem: construir um plano experimental reprodutível; aplicar análise estatística apropriada e reportar resultados.
Prática Laboratorial
Objetivo: Aplicar em contexto laboratorial as metodologias e técnicas essenciais de cultura celular dos módulos 1-3, garantindo boas práticas e reprodutibilidade.
– Técnicas de cultura celular: demonstração e prática
o Boas práticas
o Trabalho em condições assépticas
o Descongelação e criopreservação
o Procedimentos de subcultura
– Métodos e aplicações de cultura celular: demonstração e prática
o Deteção de contaminação o Ensaios com culturas celulares
o Troubleshooting
Distribuição de Avaliação
– Prática contínua (caderneta de competências) – 40%
– Miniprojecto: desenho de um estudo in vitro (com 2D ou 3D), plano de amostragem, controlo, métricas, análise estatística prevista – 40%
– Quizz teórico (15–20 perguntas) – 20%
Estágio(s)
NAO